测序类样品处理存储及运输指南
1.样本准备基本原则
1.1代表性原则
取样的代表性关系到实验结果是否准确以及具有生物学意义，因此应根据实验目的和样本情况慎重选择取样方案。疾病组织样本中应不带有正常组织，正常组织样本不能含有病变组织。保证实验组与对照组样本在取材时间、部位、处理条件等方面尽可能保持一致，否则可能会影响实验结果的可信度。
1.2迅速性原则
样本质量对实验结果影响很大，因此用于测序研究的样本在采集、制备、贮存以及运输过程中应尽可能地做到迅速，最大限度地缩短从样本采集到实验的时间，避免核苷酸尤其是RNA的降解。
1.3分装备份原则
为避免反复冻融影响样本质量，建议样本采集后立即进行分装保存。在采样允许的情况下，每例样本尽量准备多份分装好的样本作为备份。对于联合分析或者多个检测项目时，最好预先分装好。
1.4污染控制原则
取样工具，如切割用的手术刀，盛放容器，应尽量选用干净的的一次性工具（转录组需要RNase-free），若是重复利用的工具，建议进行RNase灭活处理。
1.5低温原则
样本收集过程尽量在冰上操作。样本收集之后，液氮速冻，-80℃保存。寄送过程保证足量干冰。
2.样本送样量要求
备注：
（1）不同类型样本的RNA产量差别较大。含肌纤维、脂肪类物质的动物组织以及含多糖多酚、淀粉较高的复杂植物样本，RNA提取率一般较低，送样量需加大。
（2）长期保存的样本有更高的降解风险，因此样品应尽量选取新鲜采集样本。
3.样本制备方法
3.1植物组织
（1）选取所需的新鲜组织，冲洗干净（转录组用RNase-free无菌水），再使用75%乙醇冲洗，用吸水纸吸干样品表面，保存于RNase-freeEP管/冻存管，或者用锡箔纸包裹。
（2）采用RNAlater等保护剂保存，或直接液氮速冻，-80℃保存。
备注：
选材时应选取核酸含量较多部位，如植物的幼嫩部位。
建议植物混合取样，应尽量选择长势及外部环境等条件一致的样品进行混养。
大部分的植物样品可直接浸泡在RNAlater等保护剂中，但对于有石蜡层等天然屏障植物组织样本，需要将植物样品尽量剪成小块或进行匀浆，确保保护剂能渗透到组织内部。
如果不使用保护剂处理，清洗干净后液氮速冻后干冰寄送即可。
3.2动物/临床组织
（1）选取所需的新鲜组织，在冰上迅速用预冷的PBS缓冲液（转录组用RNasefree）或的0.9%生理盐水（转录组用RNasefree）冲洗，并剔除结缔组织、脂肪组织和毛发等非研究所需的组织类型。操作时间过长会导致RNA降解，建议不超过2min。
（2）如果组织体积较大，应尽量将组织切成黄豆大小的小块，长宽高均≤0.5cm的小块（组织块越小，保存效果越好）。
（3）样本保存：
方案一：采用RNAlater等保护剂保存，注意请严格按照相关产品的说明书进行操作。
方案二：采用TRIzol裂解液保存：首先液氮研磨样本，然后按照10-15mg组织加1mlTRIzol的比例加入TRIzol裂解液。组织样品切勿过量，常温裂解5min后，-80℃低温保存。
方案三：液氮速冻，-80℃保存（测序类通用）。
对肿瘤组织的取材，应尽可能准确地判定肿瘤和正常组织，肿瘤组织应将周围的正常组织切除干净，正常组织也应将周围的肿瘤组织切除干净。
肿瘤组织本身RNase较活跃，离体后请立即分割、速冻保存组织样本，推荐优先选择RNAlater保护剂保存。
RNAlater适用于肿瘤及容易降解的组织部位，其他正常组织同样适用。
3.3贴壁细胞
（1）确定细胞生长状态良好。
（2）去除培养基，向细胞培养瓶或培养皿中加入PBS缓冲液快速清洗，清洗之后彻底去除PBS缓冲液。
（3）按每10cm2培养面积（相当于六孔板一个孔或35mm直径培养皿）加1mlTRIzol得比例加入TRIzol试剂。用1ml枪头反复吹打，使TRIzol接触所有长有细胞的培养瓶表面。充分消化后，将TRIzol液体全部转移到RNase-free的螺旋口冻存管中。
（4）液氮速冻，-80℃保存。
备注：条件不允许时，可加入预冷PBS缓冲液，用干净的细胞刮棒将细胞刮于培养皿的一侧（动作要快），冰上斜置培养皿，使得缓冲液流向一侧。移液管吸取溶解产物至预冷的离心管内。离心去上清收集细胞沉淀，直接液氮速冻，-80度保存，干冰运输。
3.4悬浮细胞
（1）确定细胞生长状态良好。
（2）离心得到细胞沉淀，去除培养基，加入PBS缓冲液快速清洗，离心去除PBS缓冲液。
（3）按照每5×个细胞加入1mlTRIzol的比例加入TRIzol试剂。用1ml枪头反复吹打，直至看不见成团的细胞块，整个溶液呈清亮而不黏稠的状态。
（4）液氮速冻，-80℃保存。
备注：条件不允许时，离心去上清收集细胞沉淀，直接液氮速冻，-80度保存，干冰运输。
注意事项：
细胞培养过程中，可能会遇到支原体污染，建议在样本收集之前进行支原体检测，以免支原体污染影响样本数据。检测方法可根据个人需求选择市面上的相应检测试剂盒。
原代细胞量尽量多一些，尽量。若不能达到，可采用微量细胞抽提盒，但抽提试剂盒属于特殊物料需要采购，周期可能会较长。
3.5细菌
（1）显微镜下观察细菌生长状态，收集对数期的细菌
（2）离心去除培养基，收集菌体
（3）液氮速冻，-80℃保存。
备注：不建议用RNAlater保存，因为RNAlater密度较大，提取时不易分离菌体。
3.6培养真菌
（1）将待测真菌在直径6cm的培养皿中培养3天
（2）用封口膜对培养皿进行封口，再放置于封口袋中，里面添加棉花等固定，常温运输。
3.7真菌菌菇类
（1）将真菌类植物样本切成长宽高均≤0.5cm的小块
（2）液氮速冻，-80℃保存。
4.样品标识、包装及运输
4.1样品标识
（1）样品管标记名称务必与样品信息单上的名称完全一致。样本命名只能是以英文字母开头，数字、"-"(短横线）任意组合，不能包含中文，空格或其他特殊字符，正确示例：A1,A-2,B-1,B-2。
（2）请在每个样品管上清晰、简明地标记样品名称（采用质量较好的油性笔，并避免与乙醇等有机溶剂接触，以免标记模糊）；
（3）样品管标记名称务必与样品信息单上的名称完全一致。
4.2样品包装
（1）样品尽可能采用RNase-free的1.5ml或者2ml离心管（进口离心管）保存，运输时采用封口膜密封离心管，如管内为有机溶剂，务必采用螺旋口的冻存管并密封。
（2）不方便存储在离心管中的体积较大的组织样品，推荐采用锡箔纸等材料仔细包装。
4.3样品运输
推荐采用双层泡沫盒密封包装，盒中加入足量的干冰。同时按照要求填写技术需求表并将电子版发送给销售人员。