一、实验原理:
Southern印迹杂交(Southernblot)是年由英国人southern创建,是研究DNA图谱的基本技术。Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法。一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段,将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上,经干烤或者紫外线照射固定,再与相对应结构的标记探针进行杂交,用放射自显影或酶反应显色,从而检测特定DNA分子的含量。
二、科沿有道实验流程:
三、Southern杂交检测样本收集注意事项:
1.新鲜组织:
用解剖刀等迅速切成小碎块,约30-mg,放入2.0mL离心管中,开盖液氮速冻15min,-80℃保存,干冰运输。
每个southernblot泳道提供2-3管样品。
注:(1)解剖刀处理组织的时间尽量控制在1min以内。
(2)液氮速冻时必须开盖,以防炸裂。
(3)对于较难提取的植物组织,如苎麻、榨菜、枣子、鱼、甘蔗、大薯等,1-2g样品用铝箔纸包好,液氮速冻15min,-80℃保存,干冰运输。
2.细胞样品:
悬浮细胞0-rpm,5min,常温离心收集细胞。贴壁细胞用胰蛋白酶消化后,吹打收集,PBS洗涤细胞,去除多余培养基和胰蛋白酶。开盖液氮速冻15min,-80℃保存,干冰运输。
一般情况下,细胞培养的6孔板,每孔细胞数量约为0.5~2×个。每个离心管中的细胞数量控制在5×个左右!每个southernblot泳道提供2-3管样品。
3.DNA样品(双蒸水水溶解):
2-8℃短期保存,-20℃长期保存;加冰块低温运输。
质量检测:取1-2μL的DNA进行琼脂糖凝胶电泳,无蛋白质和RNA等物质污染,无降解弥散,条带清晰。
纯度、浓度检测:OD/=1.8~2.0,OD/>2.0;浓度≥ng/μL。
北京科沿有道生物科技有限公司,专注于生命科学最前沿科研技术服务,具有较好的生物学和医学技术服务平台,能够提供实验课题设计、论文编辑润色,以及细胞实验、动物模型、病理检测、分子实验、免疫检测、病毒包装、组学服务、基因编辑等整体课题一站式服务。
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