细胞学堂HMC3细胞培养从零开始

基础信息

培养条件

培养液:MEM(含NEAA)+10%FBS+1%P/S

二氧化碳培养箱:稳定的温度(37℃),稳定的CO2水平(5%)

生长特性

贴壁,巨噬细胞样

传代比例和频次

推荐1:3~1:5传代,每3~4天传代一次

细胞类型

小胶质细胞

形态学

巨噬细胞

背景介绍

HMC3细胞系,是通过人胎脑源性原代小胶质细胞培养物的SV40依赖性永生化建立的,静息HMC3细胞的小胶质细胞/巨噬细胞标志物IBA1呈强阳性,星形胶质细胞标志物GFAP呈阴性。

活化小胶质细胞的标志物,即MHCII、CD68和CD11b,在静息HMC3细胞中呈阴性,但在被IFN-γ(10ng/mL,24小时)激活后上调。

具体应用

神经科学,神经炎症

转化的人小胶质细胞代表可以无限生长的同质细胞群,并且可以用于小胶质细胞功能的生化分析的便捷系统。正如实验所证明的,它们还可以进行转染,这对研究小胶质细胞中各种转染基因的表达调控有重要意义。

培养注意事项

12-3天换液一次;

2培养过程中可能会有细胞碎片产生,及时换液除去即可。

传代步骤

1吸出原培养液;

2加入2mL左右PBS,轻轻晃动培养瓶润洗细胞,吸出PBS丢弃;

3加入1mL左右胰酶,轻轻晃动培养瓶,使之浸润所有细胞;

4放入培养箱消化,消化2-3分钟,轻拍培养瓶侧壁,显微镜下看到细胞脱壁且聚集的细胞团松散开后,可终止;

5加入3mL含血清的培养基,终止消化,吹打细胞使之脱壁,并在液体里反复吹打,使细胞混匀为悬浮液,这时可以在显微镜观察;

6收集细胞悬液离心,rpm/min3分钟,离心完吸出上清丢弃;

7加入新鲜培养基,吹打几下混匀细胞即可;按需接种到新培养瓶,补足培养基,拧松瓶盖或使用透气瓶盖进行培养;

8检查培养箱二氧化碳、温度和水盘。

换液步骤

1吸出旧培养基,用PBS进行润洗,然后加入新的培养基;

2每2~3天换液一次。

冻存步骤

1配制冻存液,冻存液推荐配比:55%(基础培养基DM/F12)+40%(血清)+5%(DMSO);

2DMSO配制的时候会发热,一定要等冻存液冷却后使用,避免灼伤细胞;

3细胞消化下来制成细胞悬液;

4rpm3分钟离心后去上清,尽量吸干净上清;

5加入配制好的冻存液重悬,建议一个T25长满,冻存1支,或者细胞计数后,按照3~5×cells/支冻存;

6分装好的冻存液转入程序冻存盒,放入-80℃冰箱过夜;

7从-80℃冰箱取出冻存管,并迅速转移到液氮长期保存。

复苏步骤

1将水浴锅预热至37℃,准备好干净的一次性PE手套,向一个无菌离心管内加入5mL无菌培养基;

2将细胞从液氮罐中取出,放入PE手套中,迅速没入水浴锅,摇晃冻存管,使细胞快速溶解,以1分钟内全部溶解为宜;

3在超净台中,将复苏好的细胞液加入到装有新鲜培养基的离心管内,rpm/min离心3分钟,离心完毕去掉上清;

4取适量专用完全培养基重悬细胞,接入到无菌容器中(培养瓶或培养皿),补充培养基到适宜,放入培养箱培养;

5溶解过程要快,已溶解的冻存细胞在常温中尽量短时间存放,尽快离心去除DMSO。

HMC3细胞正常生长

●参考文献●

[1]NakagawaY,ChibaK.Diversityandplasticityofmicroglialcellsinpsychiatricandneurologicaldisorders.PharmacolThera:21–35,.PubMed:

[2]JanabiN,etal.EstablishmentofhumanmicroglialcelllinesaftertransfectionofprimaryculturesofembryonicmicroglialcellswiththeSV40largeTantigen.NeurosciLett(2):-,.PubMed:

[3]LiB,etal.NOX4expressioninhumanmicroglialeadstoconstitutivegenerationofreactiveoxygenspeciesandtoconstitutiveIL-6expression.JInnateImmun1(6):–,.PubMed:

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