年,HUVEC细胞株由HiroyoshiHoshi、WallaceL.Mckeehan从一段长约10-20cm的人正常脐带静脉中获取、建立。
年,SetsukoShioda等人发现HUVEC细胞株(passage31)在贴壁汇合时细胞与细胞之间存在间隙,这与典型的内皮细胞特征有所不同。
SetsukoShioda等人研究发现,HUVEC细胞株18-30代的倍增时间为23.5个小时,24-27代的倍增时间为67个小时,27-30代的倍增时间为84个小时,32-34代的倍增时间为个小时。培养至40代后,细胞形态出现多样化,有些细胞变大或变小,有些细胞出现多核;细胞密度下降、倍增时间延长。最后细胞在第54代停止生长,ATCC的预期寿命也显示在50-60代。
更重要的发现是,HUVEC的HHV-6(Humanherpesvirus6)病毒检测呈阳性,HHV-6基因组整合到了HUVEC的9号染色体长臂的远端。不过整合区域位于亚端粒,HHV-6基因组只有一个拷贝数,因此对HUVEC细胞增殖及端粒功能未产生影响。
使用范围:本产品仅限于科学研究,决不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用。
该细胞系培养所用基本培养基为F-12KMedium,配置完全培养基时需加入10%FBS,0.1mg/mLheparin+0.3mg/mLEndothelialCellGrowthSupplement(ECGS).
拆包&存储:
1.请立即检查包装袋是否有破损或漏液
2.请立即将细胞培养瓶从包装盒中取出,并按照下方操作步骤进行培养传代注意:如为冻存管,请收到后立即解冻培养
对于贴壁培养的细胞,寄送前,我们会将培养基充满整个培养瓶,以减少产品运输过程中贴壁细胞的脱落。
培养瓶中细胞操作步骤:
1.收到细胞产品后,请注意观察是否有污染。将培养瓶置于倒置显微镜下仔细检查是否浑浊、是否细菌污染。因在运输过程中存在颠簸,且有些细胞对温度变化也很敏感,可能存在一些细胞脱落漂浮的情况,这些细胞仍是活细胞,请勿丢弃,可离心富集后传代使用。
2.对于贴壁培养的细胞,在生物安全柜环境中,用真空泵去除培养瓶中的多余培养基,至剩余5-8mL左右,随后将细胞置于含有5%CO的37℃恒温培养箱中培养。如果细胞已经长满培养瓶,请立即传代。
3.对于悬浮培养的细胞,在生物安全柜环境中,转移培养瓶中的细胞至离心管中,离心×g/5-10min,去除上清后,用5mL培养基吹散细胞,转移至新的培养瓶中,随后置于含有5%CO的37℃恒温培养箱中培养。
冻存细胞操作步骤:
注意:为保存细胞的高存活率,请收到产品后,立即解冻培养。1.将冻存管置于37℃水浴中来回晃动,迅速解冻。为避免污染,确保冻存管口置于水面之上。解冻需迅速,大约2分钟。2.一旦冻存管中液体融化后,立即取出,采用70%酒精喷拭冻存管表面。从此步开始,后续操作须在生物安全柜中完成。3.将冻存管中的液体转移到含有5mL完全培养基的离心管中,离心Xg/5-10min,用真空泵去除含有冻存液的上清。
4.用完全培养基重新悬浮细胞并转移到新的培养瓶中。为保证细胞复苏的存活率,请将培养基在37℃水浴预热后使用。
5.将细胞置于含有5%CO的37℃恒温培养箱中培养。
贴壁细胞传代培养:
1.吸取并弃掉培养瓶中培养基。
2.加入1.0mL0.25(w/v)Trypsin-0.53mMEDTA溶液,并置于37℃培养箱中孵育,直至细胞从壁上脱落分离。此过程大约需要3至5分钟(此处为12.5cm2培养瓶所用体积,可根据实际情况增减用量)。
3.加入2mL完全培养基中和胰蛋白酶,并轻轻吹打将细胞从培养瓶表面吹落,并使细胞分散。
4.离心Xg/5min,去除上清后,取适量的培养基将细胞重悬,取适量悬液置于新的培养瓶中,并加入新鲜细胞完全培养基至总体积为4mL。
5.将细胞置于含有5%CO的37℃恒温培养箱中培养。
传代比例:建议1:2至1:4
培养基换液:每隔2至3天。
细胞冻存液,请使用产品:CryoFrozenMedium(Cat#CTCC--)
离心收集细胞后,加入适量冻存液(每管细胞冻存量达到10的6次方),将冻存管放入冻存盒置于负80冰箱,24h后将冻存管转入液氮长期保存。
参考文献:
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